На экспозиции зритель может познакомиться с русской иконой XVI–XXI вв.; узнать о традициях византийского искусства и их отражении в различных школах иконописи; познакомиться с образцами православного искусства, написанными темперой и маслом, выполненными в техниках медного литья, эмали, золотного шитья.

В музейном зале представлены иконописные школы Новгорода, Москвы, Петербурга, Киева, Палеха, Мстеры, Урала, Сибири. Преобладают в собрании музея иконы уральского и сибирского письма: им отведен самый большой раздел экспозиции.

Произведения иконописи поступили фонды Омского музея изобразительных искусств еще в 1920-е гг. благодаря неутомимой собирательской деятельности первого директора музея Фёдора Васильевича Мелёхина.

В числе первых экспонатов были иконы: «Успение» в серебряном окладе, «Богоматерь Владимирская», «Богоматерь Казанская» эпохи Павла I; иконы в серебряных окладах западного письма, созданные в XVIII в., подписные иконы мастеров знаменитого художественного промысла Мстеры.

Чудом сохранились в сложные для православия 1930-е гг. такие иконы как «Неделя Всех святых», относящаяся к московской школе XVI в., «Царские врата» XVII в. новгородской школы – один из интереснейших экспонатов собрания, поступивший в Художественную галерею в 1928 г. из Ленинградского Государственного музейного фонда. В 2002 г. реставрация этого уникального памятника открыла яркие, как самоцветы, краски древнего письма. «Богоматерь Владимирская» (Умиление) XVII в. московской школы была передана в музей в 1924 г. Она является списком с уникального шедевра древнерусской живописи, созданного в Оружейной палате Московского Кремля.

Почетное место в коллекции занимают Богородичные иконы. Вера в особый патронат Богоматери над Русью была распространена и в Сибири. Не случайно уже с XVII в. главной святыней Сибири становится «Богоматерь Знамение Абалакская», написанная протодьяконом Тобольского Софийского Собора Матфеем. В экспозиции представлен список с этой иконы, созданный в конце XIX в.

Можно выделить в составе фонда большую группу икон Спасителя, праздничные иконы Святителя Николая Чудотворца, Святого Пророка Илии, русских православных святых. Экспозиция знакомит зрителя с основными типами икон: храмовой, аналойной, семейной, паломнической, путевой.

В 2000 г. была приобретена первая икона современного автора, омского иконописца Геннадия Адаева «Богоматерь Игоревская», а затем написанные им же «Царственные страстотерпцы» и «Омские священномученики – Сильвестр, архиепископ Омский, пресвитеры Михаил и Иоанн». Тем самым было положено начало формированию коллекции иконописи XXI в.